中研国测检测技术有限公司

准备工作：

1. 选择合适的Transwell小室：根据实验需求选择合适孔径的Transwell小室（通常是8μm或12μm孔径用于迁移实验，而24μm孔径常用于侵袭实验）。

2. 细胞培养：将细胞培养至对数生长期。

3. 制备细胞悬液：用无血清培养基重悬细胞，并调整细胞浓度。

实验步骤：

1. 接种细胞：将细胞悬液加入Transwell小室的上室，确保细胞均匀分布。

2. 添加趋化剂：在下室加入含有血清或特定趋化因子的培养基，以吸引细胞向下室迁移。

3. 迁移：将Transwell小室放入培养箱中，根据实验设计孵育一定时间（通常为16-24小时）。

4. 终止迁移：孵育时间结束后，取出Transwell小室。

5. 清除未迁移细胞：使用棉签或PBS轻轻擦去上室表面的未迁移细胞。

6. 固定：用甲醇或甲醛固定迁移到膜下的细胞。

7. 染色：使用结晶紫、吉姆萨染液或其他细胞染色剂对迁移到膜下的细胞进行染色。

8. 清洗：用PBS清洗多余的染料。

9. 图像获取：将Transwell膜置于显微镜下，拍摄迁移细胞的图像。

10. 细胞计数和分析：计数迁移到膜下特定区域的细胞数量，或者使用图像分析软件进行定量分析。

数据分析：

• 通过比较不同实验组之间的细胞迁移数量，可以评估细胞迁移能力的差异。

• 可以进行统计分析（如t检验或ANOVA）来确定结果的显著性。

注意事项：

• 确保细胞密度适宜，过密或过稀都会影响实验结果。

• 轻柔操作以避免损伤细胞或破坏Transwell膜。

• 实验条件（如孵育时间、细胞密度、趋化剂浓度）需要标准化，以确保实验的可重复性。

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